Histology Techniques for Tissue Examination and Preservation

TESPT SOLSYONLARI 5. Hafta 1

HSTOLOJ TEKN Tespit ve y kama Doku takibi Dehidrasyon (suyunu giderme) effafla t rma Sertle tirme Bloklama/g mme Kesit alma ve lama yap t rma Boyama Kapatma 2

DOKU TESPT Tespit i lemi; Dokuyu h cresel enzimlerin neden oldu u otoliz ve bakteri ya da mantarlarca olu turulan dekompozisyondan korur, nfeksiy zajanlar inaktive eder ya da ld r r, Dokuyu sertle tirir ve doku komponentlerini stabilize eder. yi bir fiksatif, ld r c , n fuz edici ve sertle tirici nitelikte olmal d r. 3

FKSATFLERNLEVLER Doku/organ ,i lemlers ras ndade i ikli eu ramayacak mikroanatomik yap i erisinde tutmak, Otoliz ve p trefaksiyon ( r me) gibi de i iklikleri nlemek, H credeki yap ta lar n z nmez hale getirmek. 4

FKSATFLERN ZELLKLER Dokuyu b zmemeli, i irmemeli ve eritmemeli, Enzimleri inaktive etmeli, Dokudaki mikroorganizmalar ld rmeli, Dehidratan, kar la t nda dokunun orijinal eklinikorumas n sa layacak ekilde doku elemanlar n de i ikli eu ratmal . effafland r c , sertle tirici ve boyay c ajanlarla 5

FKSATF TRLER Aldehitler: Formaldehit, gluteraldehit Oksitleyici ajanlar: Osmiyum tetroksit, potasyum permanganat, potasyum dikromat Protein denat rasyonu yapanlar: Metil alkol, etil alkol, asetik asit Di er: Civa klor r, pikrik asit, Carnoy fiksatifi, Bouin sol syonu.. 6

FORMALN Bir ok patoloji laboratuvar ndakullan lan standart fiksatif %10 luk formalindir. Formalin, formaldehitin sudaki %40 l k zeltisidir. Her t rl materyalin rutin fiksasyonu i in kullan labilir. Ucuzdur ve doku bozulmadan uzun s re saklanabilir. 7

FORMALN Formalinle imm nohistokimya uygulanabilir. tespit edilen dokulara bir ok zel boya ve Tespit, proteinlerin apraz ba lanmas ylager ekle ir. Formalinin apraz ba larolu turmas yava bir s re tir. rik asit kristallerinin erimesine yol a ar. 8

FORMALN Elektron mikroskobik inceleme ncesi tespitte uygun de ildir. Beklemekle asidik karakter kazand ndan,pH n n ~7,0 olarak ayarlanmas i in tampon sistemleri kullan l r. r: kalsiyum karbonat, magnezyum karbonat, fosfat tamponlar .. Tampon i ermeyen formalinin raf mr k sad r. 9

FORMALN HAZIRLANII 1. % 10 luk formalin sol syonu : % 40 l k formalin 100 ml Distile su .900 ml 2. N tral tamponlanm formalin (NTF) : % 40 l k formalin .100 ml Distile su .....900 ml Sodyum di-hidrojen fosfat, monohidrat ..4 gr di-sodyum hidrojen fosfat anhidr z ..........6.5 gr 10

ALKOL Etil alkol (%70-100) nadiren primer fiksatif olarak kullan lmaktad r. Glikojenin korunmas ve baz histokimyasal al malar i in kullan labilir. Bir ok dezavantaja sahiptir. Dokudan su ekerek sertle mesine, b z lmesine, h cre distorsiyonu ve protein denat rasyonuna neden olur. Ya lar n erimesine yol a abilece inden lipid al malar nda ve myelin boyalar s z konusu oldu unda kullan lmamal d r. 11

CARNOY FKSATF Glacial asetik asit, absol etanol ve kloroformdan meydana gelir. Her t rl dokunun tespitinde kullan labilir. H zl penetrasyon g sterir. Glikojen ve plazma h creleri i in iyi bir fiksatiftir. N kleik asitlerin incelenmesini gerektiren durumlarda nerilmektedir. 12

CARNOY FKSATF B z lme ve sertle meyi nlemek i in tespit 4 saatten k sa tutulmal d r. Kloroform tehlike yaratabilir. Kollajen iyi korunmaz. Eritrositler lizise u rar. Asitte eriyebilen h cre gran lleri ve pigmentler kaybolabilir. 13

BOUN SOLSYONU Pikrik asit, formaldehit ve asetik asitten meydana gelir. zellikle k k biyopsiler i in ye lenir. Klasik olarak testis biyopsilerinin tespitinde nerilmektedir. K k lenf nodlar n nbulunmas nda i e yarayabilir. Ya dokusu sar ya boyan rken lenf nod lleri beyaz olarak izlenir. 14

BOUN SOLSYONU Doku k r lgan hale gelebilece inden 18 saatten k sa tespit yap lmal d r. B y k materyallerin tespit edilmemesi gerekir. Eritrositler lizise u rar ve demir ile k k kalsiyum depolanmalar z n rler. Pikrik asit DNA degredasyonuna yol a abilir. 15

Hollande solsyonu Pikrik asit, formalin, asetik asit, bak r asetattan meydana gelir. Bouin sol syonunun modifikasyonudur. Gastrointestinal trakt s ba ta olmak zere k k biyopsilerin tespitinde kullan l r. 16

B5 fiksatifi Civa klorur, sodyum asetat ve formalinden olu ur. Lenf nodlar , dalak gibi dokular ile lenfoproliferatif hastal kku kusu bulunan t m dokular n rutin tespitinde kullan l r. B5 stabil bir fiksatif olmad ndan taze olarak haz rlanmas gerekir. A r tespit, dokuda sertle me ve frajiliteye yol a t ndan B5 de 2-4 saat kald ktan sonra formaline al nmas gerekir. 17

Zenker fiksatifi Potasyum dikromat, civa klor r ve glacial asetik asitten olu ur. Kemik ili i biyopsileri i in kullan labilir. Dokular h zl bir ekilde 8-12 saat i inde tespit olur. Histolojik ayr nt ok iyidir. Eritrositler eridi indenkanl materyaller i in ye lenebilir. Fiksasyondan sonra kromat birikintilerini uzakla t rmak i in akarsuda y kanmas ve rutin boyamadan nce civay uzakla t rmak i in iyotla muamele gerekir. Molek ler analizler ve imm nohistokimya i in uygun de ildir. Cival fiksatiflerle birlikte metal enstr manlar kullan lmamal d r. 18