Microbiology Techniques: Spore Staining, Capsule Staining, Flagella Staining, Lipid Staining

3. 3.Yapsal Boyama Yntemleri A. Spor boyama; Spor olu turan mikroorganizmalarda, vejetatif h cre normal boyalarla boyanmas na kar n, sporun etraf nda kal n muhafazalar n n bulunmas ve bunlar n ge irgen olmamas boyanmalar n imkans zla t r r. Spor boyamak i in iki metot bulunmaktad r. 1.Zeihl-Neelsen Tb. boyama y ntemi 2. Mala it ye ili boyama tekni i A. Preparat haz rlan r kurutulur ve tespit edilir. B. Mala it ye ili (%5) sol syon ile alttan s t larak 5 dak. boyan r. C. Suyla y kan r. Safranin (%0.5) veya fuchsin ile 30 saniye boyan r. D. Suyla y kan r, kurutulur ve immersiyon objektifi ile muayene edilir. Sporlar ye il ve basiller ise k rm z renkte g r l rler.

3. 3.Yapsal Boyama Yntemleri B. Kaps l Boyama; Bakterilerilerde kaps lleri g stermek olduk a nemli bir sorun olarak g r lmektedir. Kurutularak ve tespit ederek uygulanan kaps l boyama y ntemlerinde, genellikle, kaps ller b z lmekte ve iyice se ilememektedirler. Bu bak mdan negatif preparat muayeneleri yapmak daha uygundur. Bu ama la negatif boyama y ntemleri kullan labilir. ok temiz ve ya s z bir lam zerine bir ze dolusu nigrosin veya in m rekkebi konur ve kat k lt r besi yerinden al nan koloni ile s spansiyon yap l r veya s v k lt rden bir ze dolusu konarak boya sol syonu ile kar t r l r ve zerine lamel kapat l r. Karanl k saha mikroskobunda mikroplar ve etraf ndaki kaps l a k renkte g r l r.

C. Flagella Boyama; Flagella ok k k ve ok ince olmas nedeni ile en iyi elektron mikroskopla ortaya konabilir. Ancak, zel olarak boyanmak suretiyle k mikroskobu ile de g r lebilecek hale getirilebilir. Bu ama i in, flagella zerine boya biriktirilerek takriben on misli kadar kal nla t r l r ve kolay g r nmesi sa lan r. Flagella i in en uygun y ntem Modifiye Leifson veya Kodaka tekni idir.

1. Yntem iin; A. ok temiz, yasz ve przsz 4-5 lam zerine nce kalemle alttan halka eklinde birer daire izilir. B. Bu daireler i ine, formolle inaktive edilmi ve santrif jle iki defa y kanarak konsantre edilmi bakteri s spansiyonundan bir ze s spansiyonlar n zerine zel olarak haz rlanm tannik asitli bazik fuchsinden 1 er mililitre konur ve 6, 8, 10, 12 ve 15 dakika s reyle boyama yap l r. D. Boya sol syonu ok hafif akan su ile y kanarak giderilir. E.Metilen mavisi ile 30 dakika boyan r. immersiyonla bak l r. yi bir g r nt i in bazik fuchsinle olan boyama s releri ayarlanabilir. dolusu konur. C. Bu F. Y kan r, kurutulur ve

d.Lipid Boyama; H cre i indeki lipidleri boyamada genellikle, sudan siyah kullan l r. A. Preparat haz rlan r, kurutulur ve tespit edilir. B. Preparat sol syondan konarak 15 dakika boyan r. C. Boya d k l r ve havada kurtulur. D. Ksilol i inde y kan r ve tekrar kurtulur. E. Safranin (%0.5 veya sulu fuchsinle 5- 10 saniye boyan r. F. Boya d k l r, su ile y kan r, kurutulur ve immersiyonla bak l r. Mikroskop alt nda lipitd gran lleri mavi-siyah g r n rler. Bakteri protoplazmas ise pembe boyan r. zerine sudan siyah veya mavi-gri renkte

E. Polisakkarit Boyama; Bakteri ve mantar h creleri i indeki polisakkarit gran lleri, genellikle periyodik boyan rler. Polisakkaritler, periodat vas tas ile okside olarak Polialdehit haline evrilir. Bu da Schiff in fuchsin s lfit i ile k rm z renk verir. Protein ve n kleik asitler boyanmazlar. Bu boyadan, ayn zamanda, doku i indeki mantar elementlerini g sterme de yararlan l r. asit schiff ile

F. Nkleer Materyalin Boyanmas; Bakterilerdeki n kleer materyali boyamada veya bu sistemi g stermede baz y ntemler uygulanmaktad r. aras nda en yayg n olan Robinow tekni idir. A. remi kolonileri kapsayan a ar bloku kolonili y z ste gelmek zere metil alkol i ine 5 dakika b rak l r. B. Blok kar l r ve havada kurtulur. C. Blok tersine d nd r lerek temiz bir lamel zerine konur. D. Agar blok kald r l r. E. Lamel zerine yap an mikroorganizmalar havada kurutulur ve l k alkol- merk ri-klorid sol syonuna 5 dakika s reyle b rak l r. F. Suda y kan r ve %70 alkolde b rak l r). Alkolden kar l r ve 60 C de 1N HCL i inde 10 dakika s reyle tutulur. H. nce e me suyunda ve sonra da distile suda y kan r. . Sonra bufferli Giemsa sol syonunda 37 C de 30 dakika boyan r. J. Suda y kan r, kurutulur ve mikroskopla muayene edilir. Bunlar

G. Hcre Duvar Boyama; Bakterilerin Hcre Duvar n Boyama Y ntemi; A. Bakterilerden yukar da bildirildi i gibi impresyon preparata haz rlan r. B. Bouvin sol syonu ile fixe edilir. C. Sonra %5-10 luk tannik asitle 20-30 dakika muamele edilir. D. Kristal viyolet (%0.02) ile1 dakika boyan r. E. Suyla y kan r, kurutulur objektif ile muayene edilir. ve immersiyon

DEZENFEKSYON,ANTSEPS,STER L ZASYON VE UYGULAMA Y NTEMLER

GR Sa l k hizmetlerinin hemen her alan nda fiziksel, kimyasal temizlik, estetik g r nt kadar ergonomik mekan ve steril ortamlarda al ma kurallar da son derece nemlidir. E er, bir sa l k kurumunda, kurumun birimlerinde fizikokimyasal temizli in yan s ra steril ko ullar ve standart dezenfeksiyon uygulamalar yeterli de ilse veya eksikse orada tam sa l kl ve g venli hizmetten s z etmek g t r. Tar msal i letmelerde de sanitasyon ve temizlik son derece nemlidir. Bu nedenle sa l k hizmetleri ileti imi ve terminolojisinde dekontaminasyon, sterilizasyon, s k a kullan lan antisepsi,

Dekontaminasyon Nesnelerden veya canl dokulardan patojen organizmalar n temizlik, dezenfeksiyon, sterilizasyon ve/veya antiseptikler ile uzakla t r lmas i lemidir. Dezenfeksiyon Hastane veya laboratuvar ortam nda veya k meslerde kullan mda olan maddelerin veya gere lerin patojen mikroorganizmalardan ar nd r lmas ve ld r lmesi i lemidir. Bu ama la kullan lan maddelere dezenfektan denir. Sterilizasyon Ortamda bulunan malzeme veya materyallerin birlikte bulunduklar mikroorganizmalar n (mantar, bakteri, vir s vs) her t rl canl ve aktif ekillerinin ld r lmesi ve temizlenmesi i lemidir.

Antisepsi V cudun y zeysel dokular (deri, mukozalar) ile yara ve lezyonlar nda bulunan patojenlerin kimyasal maddeler kullan larak ld r lmesi i in yap lan uygulamad r. Bu ama la kullan lan kimyasal maddelere antiseptik denir. Pastorizasyon zellikle y ksek s derecelerinde bozulabilen organik maddelerin belli s derecesinde belli s relerde (63-65 C de 30 dakika veya 71-72 C de en az 3-5 saniye bekletilerek uygulanan sterilizasyon y ntemidir. nl bilim adam Louis Pasteur taraf ndan geli tirdi i i in onun ad yla an lan bir sa l k kavram d r.

Biosid Canl organizmalar n (sinek, kene vb.) zellikle mikroorganizmalar n geli melerini durdurma ve onlar ld rme etkisindeki kimyasal maddelere biosid denir. Bu kimyasal maddeler mikrop t rlerine g re farkl ifade biyositler; bakterisit, fungusit, pestisit, akarisit olarak isimlendirilirler. Hastane veya laboratuvarlar gibi mekan sterilizasyonunda dezenfektanlar ve antisepsi i lemlerde kullan lan antiseptikler; mikrobisidler ve mikrobiyostatikler olarak iki gruba ayr l rlar. edilir. Buna g re kullan lan

Mikrobisit; Mikroorganizmalar ldren herhangi bir madde veya etmene jermisit denir. Jermisit maddeler bakterisit, fungusit ve virusit olarak da an l r. Geri d n ms zd r. Mikrobiyostazis; durdurulmas / nlenmesi Mikroplar n remesinin nlenmesi etkisine mikrobiyostatik etki denir. Bu etki ekli, (bakteriyostatik, fungustatik) etki olarak da adland r lmaktad r. Mikrobiyostatik etki geri d n ml d r. Mikroplar n anlam nda remesinin kullan lmaktad r. Mikrobiyostatik zellikteki maddeler rne in antibiyotikler hastal klar n tedavisinde yeterli dozda ve do ru kullan lmaz ise hastalar tedavi edilemez s regelen halde kalabilirler ve bu enfeksiyonlar toplumsal sorun olmaya devam eder. enfeksiyon hastal klar